10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液

簡(jiǎn)介：

10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液適用于酸性蛋白電泳后凝膠上非變性酸性蛋白的轉(zhuǎn)膜。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷，稀釋后無(wú)需調(diào)節(jié)pH值，pH約為9.2。緩沖液主要成分為Tris，甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液（要補(bǔ)加甲醇）。

保存條件：

粉末裝常溫保存，兩年有效。

配制方法：

將10×轉(zhuǎn)膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中，徹底溶解，即配成10×轉(zhuǎn)膜緩沖液。根據(jù)下表配制成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液

使用方法：

1. 酸性蛋白非變性電泳：

各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同，因而有各自的等電點(diǎn)。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱(chēng)為堿性蛋白，等電點(diǎn)偏堿性，pI＞7，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)就偏酸性，pI＜7，自然界中大多數(shù)蛋白都是酸性蛋白。分離堿性蛋白時(shí)候，要利用低 pH 凝膠系統(tǒng)，分離酸性蛋白時(shí)候，要利用高 pH 凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統(tǒng)，蛋白會(huì)帶負(fù)電荷，蛋白會(huì)相陽(yáng)極移動(dòng)；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進(jìn)行，蛋白帶正電荷，這時(shí)候需要將陰極和陽(yáng)極倒置才可以電泳。酸性蛋白電泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào):RTD6130）。

2. 轉(zhuǎn)膜：

 ① 轉(zhuǎn)膜方法：酸性蛋白在非變性狀態(tài)的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。

 ② 三明治結(jié)構(gòu)：由于酸性蛋白pI＜7 在堿性轉(zhuǎn)膜緩沖液中帶負(fù)電荷，轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜相同，即根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治，即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極一側(cè)，凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯負(fù)極一側(cè)，這樣凝膠上帶負(fù)電荷的酸性蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。

酸性蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作：

負(fù)極（電轉(zhuǎn)夾黑色面）-海綿墊-3至5層濾紙-凝膠-膜-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuǎn)夾白色面）

 ③ 膜的選擇：膜可以用PVDF膜或NC膜，根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái)，大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑，低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤(rùn)濕活化，NC膜只需用轉(zhuǎn)膜緩沖液潤(rùn)濕就可以。

④ 轉(zhuǎn)膜條件：

由于在非變性條件下，不同酸性蛋白的空間結(jié)構(gòu)，聚合狀態(tài)，電荷數(shù)量都有不同，以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對(duì)自己的目的蛋白，最好經(jīng)過(guò)1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。