DAPI染色液（DAPI Stain Solution,10 μg/ml）

●  產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是適用于常見細(xì)胞和組織細(xì)胞核染色的染色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C₁₆H₁₅N₅? 2HCl ，MW為350.25，CAS Number 28718-90-3。

DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍，DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。 DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長(zhǎng)僅有少部分重疊，可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/span>

本DAPI染色液為即用型，濃度為10μg/ml，可以直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

● 貯存：

-20℃避光保存，一年有效。

● 操作步驟：

一 懸浮細(xì)胞染色

1.1 500 g（2400 rpm，下同）離心收集細(xì)胞樣品于1.5 ml離心管內(nèi)，加入0.5 ml固定液（貨號(hào)：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細(xì)胞，常溫固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過夜)。

1.2離心去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

1.3 細(xì)胞沉淀中加入200 μl DAPI染色液，重懸細(xì)胞，37℃避光染色10-15分鐘，手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

1.4 離心收集沉淀，重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光淬滅封片液（貨號(hào)：AM0510）于載玻片上，加入等體積步驟1.4染色后細(xì)胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

1.6 熒光顯微鏡下紫外激發(fā)觀察可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測(cè)。

二 貼壁細(xì)胞染色

2.1 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，生長(zhǎng)至50%-80%滿度。

2.2刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5 ml固定液，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過夜)。

2.3去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。

2.4加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光染色10-15分鐘，手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

2.5去盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。

2.6滴一滴抗熒光淬滅封片液（貨號(hào)：AM0510）于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

2.7熒光顯微鏡下紫外激發(fā)觀察可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)示例：

操作流程：使用不同濃度星飽菌素（Staurosporine，STS）凋亡處理Jurkat細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞密度為1×10⁶/ml，每孔2 ml接種于六孔板中；加入終濃度為0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO₂培養(yǎng)3小時(shí)；500 g 3 min收集細(xì)胞；細(xì)胞沉淀中加入1 ml固定液，常溫固定10 min；1×PBS漂洗兩次；細(xì)胞沉淀中加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光染色10 min；離心后細(xì)胞沉淀重懸于100 μl 1×PBS中；取5 μl細(xì)胞懸液滴于載玻片上，加5 μl 抗熒光淬滅劑，封片觀察。

使用DAPI染色一發(fā)表部分文章列表

1. [2022 IF=4.9] The Transcription Factor MiMYB8 Suppresses Peel Coloration in Postharvest ‘Guifei’ Mango in Response to High Concentration of Exogenous Ethylene by Negatively Modulating MiPAL1.

Author: Muhammad Muzammal Aslam, Mingrui Kou , Yaqi Dou, Shicheng Zou, Rui Li, Wen Li, Yuanzhi Shao.

Journal: International Journal of Molecular Sciences 2024, 25, 4841.

Institution： Sanya Nanfan Research Institute, Hainan University

Paper link：https://doi.org/10.3390/ijms25094841