離心式去垢劑去除柱
貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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DD0550
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離心式去垢劑去除柱(處理25-100 μl蛋白樣品)
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10套
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● 產(chǎn)品組成:
貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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DD0550-01
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0.5 ml去垢劑去除柱(含套管)
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10套
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DD0550-02
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2 ml尖底離心管
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10個(gè)
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● 產(chǎn)品介紹:
離心式去垢劑去除柱能夠通過離心快速去除蛋白溶液或質(zhì)譜分析中肽段溶液中的常用去垢劑,包括離子型去垢劑,非離子去垢劑和兩性離子去垢劑。在蛋白實(shí)驗(yàn)中,去垢劑在促進(jìn)蛋白溶解,增加蛋白穩(wěn)定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而,蛋白溶液中的去垢劑會(huì)對(duì)下游實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響,如ELISA,等電聚焦以及質(zhì)譜分析等。在質(zhì)譜分析中,去垢劑會(huì)與肽段形成加合離子抑制肽段離子化,導(dǎo)致m/z值的遷移。因此,質(zhì)譜分析中去除肽段溶液中多余的去垢劑是影響分析結(jié)果的重要因素。該去除柱可以高效(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。
去垢劑去除柱參數(shù)如下:
柱體積
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填料溶脹后體積
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處理樣品體積
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推薦起始樣品濃度
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去除效率
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0.5
ml
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~0.6
ml
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25-100
μl
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>0.5 μg/μl
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~95%
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● 貯存、運(yùn)輸和效期:
4℃貯存(不能冷凍);常溫運(yùn)輸;有效期1年。
● 操作步驟
一、 去垢劑去除柱預(yù)處理:
1.1 取出柱子,放入套管中。
1.2 旋開管蓋,不要擰掉柱子底部堵頭,加入0.4
ml 1×PBS,蓋緊管蓋,常溫靜置2
min,活化填料。
1.3 擰掉柱子底部堵頭,將柱子放入套管中,1000 g 離心1
min,棄流穿液。
注:離心力不要高于1000
g,過高的離心力會(huì)損傷填料,降低去垢劑去除效率。
1.4在柱子管蓋上標(biāo)記填料在柱子內(nèi)的傾斜方向,隨后離心步驟均按同一傾斜方向在離心機(jī)內(nèi)放置柱子。
1.5柱子中加入0.4
ml 1×PBS,1000
g 離心1min,棄流穿液。至此,柱子活化結(jié)束,備用。
二、樣品去垢劑去除:
2.1 將柱子轉(zhuǎn)移到2
ml尖底離心管中,加入25-100
μl待處理樣品(樣品濃度高于0.5
μg/μl),常溫靜置2
min。
2.2 1000g 離心2
min,收集離心管內(nèi)樣品。
● 注意事項(xiàng):
1. 去垢劑去除效果:可以高效的(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。
去垢劑去除效率和蛋白回收效率
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去垢劑
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濃度
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去除效率
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BSA回收效率
(上樣量100 μg)
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SDS
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2.5%
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99%
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95%
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脫氧膽酸鈉
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5%
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99%
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99%
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CHAPS
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3%
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99%
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90%
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Triton
X-100
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2%
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99%
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87%
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NP-40
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1%
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95%
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91%
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Brij-35
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1%
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99%
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97%
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Tween-20
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0.25%
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99%
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87%
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Octyl
glucoside
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5%
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99%
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90%
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2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi),該去除柱最多處理體積是100
μl樣品,過多會(huì)導(dǎo)致收集
管中液體浸沒到去除柱。
3.
當(dāng)樣品濃度過低時(shí)(<0.5
μg/μl),需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。
● 常見問題:
常見問題
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可能原因
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解決方法
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蛋白回收率偏低
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蛋白濃度過低(<0.5 μg/μl)
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對(duì)蛋白液進(jìn)行適當(dāng)濃縮
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樣品不能流穿
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未扭掉柱子底部的堵頭
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按照步驟1.3扭掉堵頭
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● 實(shí)驗(yàn)示例: