革蘭氏染色試劑盒（Gram Staining Kit）

●  產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

革蘭氏染色法（Gram Stain）是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水使孔徑縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上，呈紫色。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，脫色后類脂外膜迅速溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物溶出，因此乙醇脫色后再經(jīng)番紅復(fù)染，呈紅色。

● 貯存和運(yùn)輸：

常溫保存，有效期一年；常溫運(yùn)輸。

● 操作步驟：

一 標(biāo)本處理：

有菌部位的標(biāo)本，如痰液、糞便、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片。

無菌部位的標(biāo)本，如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關(guān)節(jié)液等，應(yīng)取適量標(biāo)本（最高可達(dá)

5-7 ml）,經(jīng) 3000rpm 離心 10min，取沉渣涂片染色。

二 涂片制作：

菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上，標(biāo)本可直接在玻片上涂布；菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水一滴，置載玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)菌形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色。

三 染色

一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

3.1 初染：加上結(jié)晶紫染色液后，染色 1 分鐘，水洗。

3.2 媒染：加上革蘭氏碘液后染色 1 分鐘，水洗。

3.3 脫色：加上脫色液（95%酒精）,搖動(dòng)玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約 20-60秒，水洗，吸去水分。

3.4 復(fù)染：加上番紅染色液后，染色 1 分鐘，水洗，吸干或在空氣中涼干后，油鏡鏡檢。

四 結(jié)果：

葡萄球菌：紫色、球形、葡萄狀排列。大腸桿菌：紅色、桿狀、散在排列。

          葡萄球菌-革蘭氏陽性菌  紫色                             大腸桿菌-革蘭氏陰性菌 紅色

革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，或已死亡及部分菌體自行溶解，都常呈陰性反應(yīng)。

● 注意事項(xiàng)：

1．標(biāo)本涂片不能太厚，嚴(yán)格按操作要求進(jìn)行。若涂片較厚，應(yīng)延長(zhǎng)脫色時(shí)間，直至不再出現(xiàn)紫色為止。

2．玻片通過火焰溫度不能太高。

3．革蘭氏碘液變透明，則不能使用。

4．水洗時(shí)動(dòng)作要輕柔,沿載玻片對(duì)角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉。