核酸快速高靈敏度染色試劑盒

● 儲存、運(yùn)輸及效期

常溫保存；常溫運(yùn)輸；有效期一年。

● 產(chǎn)品簡介

核酸快速高靈敏度染色試劑盒(Fast and High Sensitivity Stain Kit for Nucleic Acids)是一種快速簡單、可用于聚丙烯酰胺凝膠中的核酸檢測的試劑盒。該方法檢測靈敏度比 EB 高達(dá) 200 倍，能檢測到10ng的 DNA條帶，常用于檢測 SSR 標(biāo)記、SNP 標(biāo)記等。

本試劑盒可足夠用于25塊常規(guī)的8×10cm凝膠的染色。

說明書后附有實驗記錄表格，方便記錄實驗步驟。

● 產(chǎn)品組成：

● 注意事項：

1. 由于染色非常靈敏，操作時請注意盡量使用高純度的水，并確保所使用的器皿非常清潔，最好使用潔凈的玻璃器皿。操作時必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。

2. 需自備無水乙醇及MilliQ級純水。

3. 下述使用說明中各種溶液的使用量適用于大小為8×10cm厚度為0.75-1mm的凝膠。對于更大的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放大，對于更厚的凝膠，作用時間需按照厚度的比例適當(dāng)延長。

4. 本說明書所指的常溫溫度為20-25℃，操作溫度較低時由于溶液的擴(kuò)散能力下降，各步驟需適當(dāng)延長時間。

5. 基本顯色液(10×)在低溫環(huán)境下可能會出現(xiàn)沉淀，可在37℃水浴中溶解，并充分混勻后使用。

● 使用方法：

一. 漂洗步驟：

電泳結(jié)束后，凝膠中加入100 ml MilliQ級純水，在搖床上常溫?fù)u動2分鐘，搖動速度為60-70rpm；重復(fù)此步驟1次。

二. 染色步驟：

2.1 染色：

棄水，加入100 ml即用型染色液，在搖床上常溫?fù)u動5分鐘，搖動速度為60-70 rpm。  

注：即用型染色液配制后需在20分鐘內(nèi)使用。

2.2 水洗滌：

棄原有溶液，加入100 ml MilliQ級純水或雙蒸水，在搖床上室溫?fù)u動15-20秒，搖動速度為60-70rpm。

注意：水洗滌的時間不能超過20秒。

三. 顯色步驟：

棄水，加入100 ml顯色液，在搖床上室溫?fù)u動3-10分鐘，直至出現(xiàn)比較理想的預(yù)期核酸條帶，搖動速度為60-70rpm。

注：顯色加速液(500X)有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥內(nèi)操作；

顯色液配制后需在20分鐘內(nèi)使用。

四.  終止步驟：

棄顯色液，加入100 ml MilliQ級純水，在搖床上常溫?fù)u動3-5分鐘，搖動速度為60-70 rpm。

五. 保存：

可在MilliQ級純水中保存；或采用適當(dāng)?shù)姆绞街苽涑筛赡z。

● 常見問題：

一.  背景太深：

1.1 顯色時間過長。通常顯色反應(yīng)會在10分鐘內(nèi)結(jié)束，顯色反應(yīng)時間過長會導(dǎo)致背景很深。

1.2水的純度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高純度水。

二.  核酸條帶非常淺：

2.1 染色后水洗滌時間過長。在染色溶液染色后需嚴(yán)格控制水洗滌的時間，水洗滌的時間不能超過20秒，否則會導(dǎo)致過多的染色離子被洗去，導(dǎo)致檢測靈敏度下降。

2.2顯色加速液（500×）失效。顯色加速液（500×）不能低溫保存，低溫保存會導(dǎo)致加速液失效。

三.  凝膠上出現(xiàn)小點或其它非核酸的痕跡：

3.1 凝膠沒有充分被溶液浸沒。請注意選擇大小合適的容器，并加入足量的各種溶液，同時需保持適當(dāng)?shù)幕靹蛩俣却_保凝膠可以被溶液浸沒。

3.2 用于染色的容器沒有充分洗滌干凈。容器需先用洗滌劑充分洗滌，隨后用自來水充分沖洗，最后用高純度水再洗滌數(shù)次。該容器最好能專用于染色，并注意避免各種可能的污染。

3.3 指紋或其它壓痕。請注意戴手套操作，切勿直接接觸皮膚。操作時請注意盡量勿擠壓、折疊或摩擦凝膠。

3.4 有金屬物質(zhì)接觸凝膠。金屬物質(zhì)例如金屬鑷子等接觸凝膠會出現(xiàn)非特異性痕跡。

實驗記錄表格

實驗日期：

實驗示例：

1 雙鏈DNA染色：

2 單鏈DNA/RNA染色：

使用RTS5101 核酸快速高靈敏度染色試劑盒產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2022 IF=8.4] A novel label-free fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and SYBR Green I- aided amplification strategy. 

Author：Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong Guo. 

Journal: Sensors and Actuators B: Chemical.  2019, 305:127348

Institution：Ningbo University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348

2. [2022 IF=8.4] A robust photoluminescence screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate cancer. 

Author：Guodong Li，Chung-Hang Leung. 

Journal: Chemical Science 2020, 11,1750–1760  

Paper link：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8148385

3. [2022 IF=6.0] A novel resonance Rayleigh scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted signal ampli?cation by G – quadruplex nanowires formation 

Author：Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,LiMa, Weijun Kang,Xue Hui Liu, Ling Mei Niu , Zhiyong Guo

Journal: Arabian Journal of Chemistry (2020) 13, 6598–6605 

Institution：Ningbo University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2020.06.016

4. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution：School of Public Health, Hebei Medical University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340

5. [2022 IF=5.1] Repurposing sodium stibogluconate as an uracil DNA glycosylase inhibitor against prostate cancer using a time-resolved oligonucleotide-based drug screening platform.

Author: Sang-Cuo Nao, Le-Sheng Huang, Daniel Shiu-Hin Chan, Xueliang Wang, Guo-Dong Li, Jia Wu, Chun-Yuen Wong, Wanhe Wang, Chung-Hang Leung

Journal: Bioorganic Chemistry 144 (2024) 107176.

Institution：University of Macau

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2024.107176