過濾紙(類囊體提取用)
1 新鮮采集植物葉片(約30克),快速去除葉脈并將葉片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在120 ml的預(yù)冷的1×類囊體膜提取緩沖液(即用型)中(每克葉片加4 ml)。
2 將浸泡了葉片的溶液轉(zhuǎn)移到電動(dòng)勻漿機(jī)(即家用制備果汁的勻漿機(jī),可選貨號(hào):RT-2243A)中,低速勻漿5秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入勻漿機(jī)底部后,再低速勻漿5秒。注意:除電動(dòng)勻漿機(jī)外,還可以選擇玻璃勻漿器和研磨(加玻璃珠)等裂解細(xì)胞的方法,但這些方法的單次處理量都比較小,需要將樣品分成很多小份單獨(dú)勻漿,然后再匯集。注:不要用液氮研磨,會(huì)損傷類囊體膜;不要過度勻漿,把葉片打碎即可,否則會(huì)降低類囊體膜得率。
3 過濾勻漿液:2層過濾紙放于漏斗上,用漏斗將濾液收集到預(yù)冷的250 ml量筒中,一般分三次收集,總共可收集80-85 ml濾液,將濾液等分到4個(gè)預(yù)冷的50 ml的塑料離心管中(每個(gè)管中的濾液不要超過35 ml)。