氨芐青霉素溶液(100 mg/ml)

● 產(chǎn)品包裝：

● 產(chǎn)品簡介：

氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)又稱安比西林、氨芐西林，是一種β-內(nèi)酰胺類抗生素,干擾肽聚糖的交聯(lián)從而抑制細菌細胞壁的合成。氨芐青霉素時常被用于分子生物學實驗研究中，如用于配制含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基或LB平板等。氨芐青霉素溶液已經(jīng)0.22 μm過濾除菌，可以直接添加到培養(yǎng)基中。一般推薦工作濃度為50～100 μg/ml。

本氨芐青霉素溶液已經(jīng)優(yōu)化溶解液，可以保持溶液在-20℃下基本不結(jié)冰，方便使用的同時降低了反復凍融對抗性的影響。

● 貯存、效期及運輸：

-20℃保存；有效期6個月；濕冰運輸。

● 使用方法：

1. 取出-20℃保存的氨芐青霉素溶液，常溫徹底溶化，完全混勻。

注：溶液在-20℃下基本為流動性溶液，如有冰晶形成，常溫徹底溶化后使用。

2.一般Amp在LB中終濃度為50～100 μg/ml?？梢源篌w按照1/1000 LB體積加入100 mg/ml Amp溶液，如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。

注：氨芐青霉素對高溫敏感，要等待LB瓊脂溫度低于55℃后再加入氨芐溶液。

  3. 在所有的細菌篩選抗生素中，氨芐青霉素的穩(wěn)定性最為不佳，參照下表確定使用的效期：

● 注意事項：

1. 衛(wèi)星菌落：LB氨芐瓊脂平板培養(yǎng)時間過長時，會發(fā)現(xiàn)一個大菌落的周圍會出現(xiàn)一些小的菌落，這些小的菌落稱為衛(wèi)星菌落（satellite colony）。原因：氨芐青霉素可以被β-內(nèi)酰胺酶（β-lactamase）水解。平板上的細菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶分泌到細胞外，隨著細菌的生長，培養(yǎng)基中的β-內(nèi)酰胺酶會不斷增加，這時培養(yǎng)基內(nèi)氨芐青霉素會被降解，因此沒有氨芐抗性質(zhì)粒的小菌群則環(huán)繞大菌落生長，產(chǎn)生衛(wèi)星菌落。衛(wèi)星菌落沒有氨芐抗性，挑取單菌落時，不要挑取衛(wèi)星菌落培養(yǎng)。

2. 質(zhì)粒丟失：氨芐抗性細菌在傳代的時候，會出現(xiàn)質(zhì)粒丟失，傳代次數(shù)越多，質(zhì)粒丟失的可能性越大。對于其他抗生素如氯霉素，細菌如果丟失了部分帶抗性的質(zhì)粒，該菌在含有氯霉素的培養(yǎng)基中是不會生長的。但是對于氨芐則不然，在液體培養(yǎng)液中，培養(yǎng)時間過長的培養(yǎng)基中氨芐的濃度會降低，丟失了一部分質(zhì)粒的細菌也可以在其中生長。因此對于使用氨芐作為抗性標記的克隆，每隔一段時間需要檢查細菌質(zhì)粒丟失情況。比較直觀的辦法就是通過SDS-PAGE，如果發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的表達水平降低了，很大可能是因為質(zhì)粒丟失了，此時需要重新轉(zhuǎn)化重組載體。

3. 不要使用配制時間過長或超過效期的氨芐溶液。氨芐存儲時間過長或者保存不當，很有可能發(fā)生降解。

4. 液體培養(yǎng)建議：在液體培養(yǎng)中，不要讓細菌長到過飽和，在LB培養(yǎng)基中，OD₆₀₀絕對不能超過3。如果是擴大培養(yǎng)，可以先把初始培養(yǎng)液內(nèi)細菌沉淀，然后利用新鮮的培養(yǎng)液重懸，再進行下一步的培養(yǎng)，這樣可以大大減少β-內(nèi)酰胺酶在液體中的含量。